Biotecnología

Resumen del Libro

Practicas: Tecnica aseptica y obtencion de cultivos puros: Aislamiento en placa y transferencia de cultivos. Preparacion de medios de cultivo. La curva de crecimiento. Aislamiento de DNA plasmidico de Escherichia coli: La minipreparacion. Purificacion, concentracion y cuantificacion del DNA. Aislamiento a gran escala de DNA plasmidico por cromatografia en columna. Amplificacion de un fragmento que contiene el gen lacZ con la reaccion en cadena de la polimerasa. Digestion del DNA con enzimas de restriccion y electroforesis en geles de agarosa. Transferencia Southern. Preparacion, purificacion e hibridacion de una sonda. Transformacion de Saccharomyces cerevisiae. Aislamiento de plasmidos de levaduras y transformacion de Escherichia coli. Determinacion de proteina. Ensayo cualitativo de la -galactosidasa en colonias de levadura. Determinacion de la actividad -galactosidasa en celulas de levaduras permeabilizadas. Ensayo de la actividad -galactosidasa en extractos proteicos acelulares. Purificacion de la -galactosidasa. Transferencia Western: investigacion de un gel transferido de proteinas con anticuerpos contra la -galactosidasa. Apendices: Protocolos y experimentos alternativos. Aislamiento y caracterizacion de mutantes auxotrofos de levadura. Medicion del pH. Empleo del espectrofotometro. Aislamiento de DNA plasmidico: la maxi-preparacion. Hibridacion en colonias. Soluciones tampon. Preparacion de tampones y soluciones. Propiedades de algunos acidos y bases concentrados. Uso de la micropipeta. Manipulacion segura de microorganismos. Listado de microorganismos. Conservacion de microorganismos y de DNA. Metodos de esterilizacion. Preparacion de soluciones stock para medios de cultivo.Crecimiento en medio liquido. Recuento de celulas viables. Determinacion de la masa celular. Determinacion del numero de celulas. Nomenclatura de las cepas. Material de vidrio y de plastico. Preparacion de tris y EDTA. Reglas